Método rápido y económico para la extracción de ADN genómico en la broca del café y su uso en PCR

Abstract

Se evaluaron seis métodos de extracción cruda de ADN con el objetivo de seleccionar un método rápido y económico para amplificar fragmentos de ADN genómico en la broca del café, mediante PCR convencional y PCR en tiempo real. Estos métodos fueron comparados con dos técnicas de extracción con purificación de ácidos nucleicos: Dneasy Tissue Kit (Qiagen Inc. Valencia, CA) y fenol cloroformo. Los tratamientos que incluyeron purificación de ácidos nucleicos y el ADN crudo extraído con los buffers TE y STE permitieron la amplificación de un fragmento de 208pb en la totalidad de las muestras mediante PCR; con este último además, se logró amplificar una región del gen receptor GABAA mediante PCR en tiempo real, después de precipitar las muestras con etanol. Estos métodos de extracción cruda fueron 54 veces más económicos que el "kit" de Qiagen. Se concluye que el método de extracción de ADN con el "buffer" STE permitió la extracción de ADN de calidad para PCR a partir de un solo individuo, el cual fue diez veces más rápido que los métodos convencionales y más económico que la técnica de Qiagen, por lo cual resulta especialmente útil en estudios de genética de poblaciones que involucran el uso de marcadores moleculares y el análisis de un alto número de muestras.